貼壁細胞接收注意事項

貼壁細胞經過快遞運輸顛簸會出現漂浮脫落等情況： 收到先放培養箱靜置穩定。如有脫落需收集處理，處理細節請查閱以下信息，原瓶內為運輸培養液，血清含量只有5%，需及時更換專用wan全培養基。

收到細胞后請把細胞圖片狀態發到群， 根據圖片可以給出接下來的處理建議（傳代或者換液），建議一比二傳代至2個T25。 

貼壁細胞傳代步驟： 準備工作：胰酶和wan全培養基（需要提前37度復溫）、PBS（常溫）避免細胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培養液

（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞。貼壁細胞傳代步驟： 準備工作：胰酶和wan全培養基（需要提前37度復溫）、PBS（常溫）避免細胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培養液

（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞。

（4） 根據不同的細胞放入培養箱時及時關注消化時間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細胞中間的細胞明顯分離變圓細胞間隙變大，顯微鏡下看細胞呈單個游離狀態，側立培養瓶細胞可以滑落時可終止消化，可以輕拍培養瓶側身。（消化時主要看消化狀態，如果沒有變圓，側立時不能滑落時，可以適當延長消化時間，每30s觀察一次細胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培養基終止消化，輕輕吹打細胞使之脫壁并在液體里反復輕輕吹打（不要太用力）使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。

（6） 收集細胞懸液離心，1000rpm/min（約250g） 5分鐘，離心完吸出上清丟棄。

（7） 加入新鮮wan全培養基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養瓶，補足wan全培養基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養。

（8） 檢查培養箱二氧化碳，溫度和水盤。

這個是貼壁細胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過程，消化至到細胞wan全變圓以后側立培養瓶細胞可以出現滑落時再終止消化。

消化到這樣的成游離狀態，后續輕輕稍微吹一下即可很好的分散細胞

后續處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細胞第二天全部貼壁培養基顏色變黃，可以換液，）無需每天換液（換液太勤可能會損失細胞影響細胞狀態）換液時候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗

（4） 根據不同的細胞放入培養箱時及時關注消化時間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細胞中間的細胞明顯分離變圓細胞間隙變大，顯微鏡下看細胞呈單個游離狀態，側立培養瓶細胞可以滑落時可終止消化，可以輕拍培養瓶側身。（消化時主要看消化狀態，如果沒有變圓，側立時不能滑落時，可以適當延長消化時間，每30s觀察一次細胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培養基終止消化，輕輕吹打細胞使之脫壁并在液體里反復輕輕吹打（不要太用力）使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。

（6） 收集細胞懸液離心，1000rpm/min（約250g） 5分鐘，離心完吸出上清丟棄。

（7） 加入新鮮wan全培養基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養瓶，補足wan全培養基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養。

（8） 檢查培養箱二氧化碳，溫度和水盤。

這個是貼壁細胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過程，消化至到細胞wan全變圓以后側立培養瓶細胞可以出現滑落時再終止消化。

消化到這樣的成游離狀態，后續輕輕稍微吹一下即可很好的分散細胞

后續處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細胞第二天全部貼壁培養基顏色變黃，可以換液，）無需每天換液（換液太勤可能會損失細胞影響細胞狀態）換液時候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗 。